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D.神经递质的刺激24.(12分)胆固醇O酰基转移酶1(SOAT1)与肝癌的发生密切相关，可作为潜在的肝癌生物标志物。科研人员从肝癌细胞Hh7中获取SOAT1基因，经原核表达、蛋白质纯化后免疫小鼠制备单克隆抗体。请回答下列相关问题：(I)从肝癌细胞Huh7中提取，通过获得SOAT1的cDNA。(2)根据SOAT1的编码序列设计的两个引物如下图1。引物F加入的EcoR I酶切位点位于端，引物R上添加的XhoI酶识别的回文序列的6个碱基是F:5-CGGAATTCATGAAGGAAGTTGGCAGTC-3'R:5-CCGCTCGAGCTAAAACACGTAACGACAAG-3'图1(3)利用上述引物对SOAT1基因进行PCR扩增，该实验设计的扩增程序中热循环次数为30次，一般PCR反应中设计的热循环次数不超过40次，原因是。PCR反应结束后，将产物经1%琼脂糖凝胶后，对PCR产物进行胶回收。(4)将胶回收后的PCR产物和载体pET32a分别用EcoR I和XhoI双酶切，加入DNA连接酶后在冰面上过夜。在冰面上操作的目的是。在将重组质粒转化至大肠杆菌前用CaC12处理大肠杆菌，使其处于的生理状态，以提高转化效率。(⑤)将测序正确的重组载体诱导表达并进行电泳，实验部分结果见下图2，SOAT1重组蛋白的相对分子质量为50kD左右，下图中基本符合要求的条带包括0kDM12345廊路：70-50-e25-解20-图2(⑥)用纯化的SOAT1重组蛋白免疫小鼠，利用技术获得SOAT1单克隆抗体细胞株以备单克隆抗体。25.野鸡的性别决定方式为ZW型(2=78)，其长腿和短腿由位于5号染色体上的A/a基因控制，圆眼和豁眼由位于12号染色体上的B心基因控制，短喙和长喙则分别由Z染色体上的H、h基因控制。让一只长腿圆眼鸡与短腿豁眼鸡进行多次杂交，子代全为长腿圆眼鸡。请回答下列问题：(1)野鸡腿的长度和眼的形状中，显性性状分别为。若利用上述野鸡验证基因的自由组合定律，可继续进行的杂交实验是(2)另取多只长腿圆眼鸡与短腿豁眼鸡杂交，若后代中长腿圆眼鸡：短腿圆眼鸡=3：1，则亲本中长腿圆眼鸡的基因型及比例为(3)喙的长度在野鸡种群中的遗传特点有」(答出2点)。若要在雏鸡时根据喙长选出雌鸡用于人工养殖，可选用的杂交组合是(写基因型组合)。(④)单体是指有一对同源染色体中丢失了一条染色体的生物个体。5号染色体单体雄鸡在减数分裂时，初级精母细胞中可形成个四分体。单体可用于基因定位，已知控制野鸡鸡爪有螺纹(D)和无螺纹(d)的基因位于常染色体上，现利用有螺纹纯合雌鸡制备若干单体，若要判断D基因所在的染色体，需准备种不同的单体雌鸡与正常的无螺纹雄鸡进行杂交，实验中某组子代表型及比例为时，D/d基因位于该组堆鸡所缺失的染色体上【生物试题】第8页共8页